融合后当杂交细胞集落生长到一定大小,培养液开始变黄,便可开始筛选抗体活性。许多方法都可以用来筛选,但应注意到筛选单克隆抗体时的一些特点;首先,培养上清中的抗体含量低于高效抗血清的抗体含量。其次,与普通抗血清不同,单克隆抗体不能多价地识别抗原。所以用来筛选单克隆抗体的方法应照顾到单克隆抗体的特点,而且要准确、迅速和方便。此外应根据所需要抗体的特点,选择不同类型的方法。一般常用的有:免疫荧光、放射免疫(RIA)、组织化学法和酶联免疫分析(ELISA)法等。最常用方法是ELISA法。在收集上清时,应在上次换液后3-4天进行,以便抗体积累。上清可不经稀释或1:5~1:10稀释后再测抗体活性,用稀释抗体进行筛选时可以筛掉弱阳性的抗体,也可以去掉因高本底所造成的假阳性。融合后第一次筛选出的阳性克隆可能因阴性克隆或其他阳性克隆的过度生长而丢失,故应尽早进行克隆。第一次筛选后也可能没筛选到阳性抗体,这可能由于分泌阳性抗体的细胞为数尚少,应重复测定活性2-3次。现将ELISA法检测杂交瘤细胞抗体的方法介绍如下:
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